培养基灭菌！（干粉培养基煮沸灭菌的操作方法及注意事项）

培养基灭菌(干粉培养基煮沸灭菌的操作方法及注意事项)

1.灭菌方法介绍

使用前，培养基必须灭菌，以杀死或去除所有活细菌。常用的灭菌方法有过滤灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和辐照灭菌。其中，湿热灭菌包括煮沸、流动蒸汽灭菌、分级灭菌和压力蒸汽灭菌四种方式。一般来说，压力蒸汽灭菌应用广泛。

但对于某些介质，高压条件会破坏介质中的某些成分，不利于介质的使用，所以只能采用煮沸灭菌。本文主要讨论煮沸灭菌的方法。

二、煮沸灭菌的常见表达

通常有以下方式来描述煮沸灭菌:

A.称取本品41.5克，加热溶解于1000毫升蒸馏水中，煮沸不超过2分钟。不需要高压灭菌。要及时准备，不要超过3个小时。(参考VRBA medium:点击查看)

B.称取本品50.3克，加入1000毫升蒸馏水中，煮沸至完全溶解，冷却至45-50℃，摇匀，倒入无菌盘中备用。不需要高压灭菌。(参考BS培养基:点击查看)

C.称取本品89g，煮沸，溶于1000ml蒸馏水中，冷却至45-50℃，倒入无菌盘中备用。注意:不需要高压灭菌。(参考TCBS文化传媒:点击查看)

d、称取本品57g，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，不要过热，待其冷却至50-55℃时，倒入无菌盘中，部分打开盖子，干燥2h，盖上盖子备用。不需要高压灭菌。24小时内使用。(参考XLD文化传媒:点击查看)

在这些描述中，特别强调了“不要高压灭菌”、“不要过度加热”和“煮沸并充分溶解”。那么应该怎么做才能做到彻底灭菌，把对培养基的破坏降到最低呢？

三、煮沸灭菌的实际操作

1.至于煮法，有人提出可以离水煮。但经过反复实验，发现这种煮沸方式有两大弊端:①温度不足以达到杀菌效果；②水煮含琼脂培养基在水浴过程中容易分层。

2.为了有效地煮沸和灭菌培养基，根据我们的实践，我们建议如下操作:

①准备电磁炉和搪瓷缸(不要用铁容器)；

(2)按比例向培养基中加入水，称入搪瓷缸中，用玻璃棒搅拌至完全溶解，无明显团块或颗粒；

③将搪瓷缸放在电磁炉上，大火烧开，期间保持搅拌，避免糊底；当液面完全沸腾时，立即将搪瓷缸从电磁炉中取出，视为沸腾操作；液面下降后，立即放回电磁炉，重复上述步骤；共煮3次。

④将煮好的培养基冷却至所需温度，倒入盘中。

四。预防措施

1.补充水分

在加热煮沸的过程中，培养基中的部分水分会蒸发，导致水分减少，从而影响培养基的质量(如平板强度等。)并导致菌落形态结果的偏差。因此，为了使误差最小化，有必要在煮沸之前向搪瓷罐中加入适量的用于制备培养基的水。经验估计，通常在每罐培养基中加入15-20毫升水。在实践中，需要根据每个实验室的具体情况(容器大小和容量)来添加水

2.溶解

煮沸前必须搅拌所有培养基直至完全溶解。不允许将结块的培养基直接加热煮沸，这样容易导致灭菌不彻底。特别是一些含琼脂的培养基，甚至有些琼脂不能完全溶解，导致倒出来的培养皿上出现明显的糠状琼脂颗粒，或者一些含染料的培养基也可能有染料颗粒，会影响培养基的使用(每种情况见下图)。

正确操作:

错误操作:

平板上出现不完全熔化的琼脂颗粒:

3.活跃的

整个煮的过程一定要不断搅拌，避免见底。

4.防烫伤

液面沸腾后，应及时将搪瓷缸从电磁炉中取出，以免液体沸腾出来，污染培养基或烫伤操作人员。